在生物医学研究和生物技术应用中，细胞活率的评估是一个至关重要的环节。无论是在细胞培养、药物筛选，抑或是细胞治疗产品的质量控制，准确评估细胞活性都是成功实验的关键。当提到细胞活率检测时，许多人首先联想到的是经典的台盼蓝染色法。因为它操作简单、成本低廉，成为实验室的“标配”方法。

然而，台盼蓝染色法并非完美无缺。它仅能反映细胞膜的完整性，无法反映细胞的代谢状态，并且对细胞有一定毒性。长时间的染色可能会影响细胞活性，操作过程中也可能存在误差。那么，除了台盼蓝，还有哪些方法可以更全面、更精准地鉴定细胞活率呢？以下将介绍四种常用的细胞活率检测技术，并深入分析它们的优缺点，以帮助大家在不同实验中更好地选择计数方法。

CCK-8试剂

CCK-8试剂（Cell Counting Kit-8）中含有WST–8，这是一种淡黄色水溶性染料，可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜产物。通过测定甲臜的吸光度，能够间接反映细胞活率和增殖能力。

优点：灵敏度高，适合高通量筛选。可以反映细胞的代谢活性，而不仅限于细胞膜的完整性。

不足：需要特定仪器（如酶标仪）测定吸光度，实验步骤较多，耗时较长（15h-4h）。

荧光染料法

使用荧光染料（如PI碘化丙啶、Calcein-AM等）标记细胞。PI仅能进入死细胞，与DNA结合后发出红色荧光，而Calcein-AM被活细胞代谢后发出绿色荧光。通过荧光显微镜或流式细胞仪检测，可以有效区分活细胞和死细胞。

优点：灵敏度高，结果准确。能够与流式细胞仪结合进行高通量分析，适合复杂样本的检测。

不足：需使用昂贵的仪器（如荧光显微镜或流式细胞仪），荧光染料可能对细胞有毒性，操作相对复杂，适合有经验的实验人员。

ATP检测法

ATP（即三磷酸腺苷）是细胞能量的直接来源。活细胞中ATP含量较高，而死细胞中ATP含量极低。通过检测细胞中ATP的含量，能够间接反映细胞活率。

优点：灵敏度极高，能检测微量细胞。结果快速，适合高通量筛选，能够反映细胞的代谢状态。

不足：要求特定试剂盒和仪器（如化学发光仪），成本较高，不适合大规模使用，同时对样本处理要求较高。

克隆形成试验

克隆（集落）用于评估细胞的增殖能力、侵袭性以及对杀伤因素的敏感性。细胞的克隆形成率，即细胞接种后的存活率，是衡量细胞成活并形成克隆数量的重要指标。并非所有贴壁细胞都能增殖形成克隆，只有既贴壁又具有增殖活力的细胞才能形成克隆。实验中通常使用平板克隆形成试验和软琼脂克隆形成试验，这些技术在抗肿瘤药物敏感性试验和肿瘤放射生物学试验中尤为常见。

细胞活率的鉴定是生命科学实验中的基础环节，而选择合适的方法至关重要。每种方法各有独特的优势和局限性，实际应用中需根据实验需求、设备条件和样本特性灵活选择。

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