918博天堂的人B细胞淋巴瘤OCILy19细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议采用1:2比例进行传代。每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比研究。如过渡培养效果不佳，建议直接使用918博天堂的完全培养基。

二、细胞处理及稳定方法

在收到细胞后，先将细胞培养至良好状态，然后灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，应使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，之后在超净工作台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。利用显微镜观察细胞生长情况并拍摄不同放大倍数的照片保存（建议拍摄40x, 100x, 200x的样本），前三天的照片将是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到的细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，请将瓶内培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养箱中进行培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，随后在显微镜下观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶，再加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行瓶分配（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打以确保细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中并在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀的细胞加入1ml的918博天堂无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱。如果后续需要转入液氮罐中，则须在-80℃下存放超过24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中并以1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

注意某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如细胞脱离较多，可将培养瓶内液体收集至离心管中并以1000 RPM离心5分钟，使用上清进行过渡培养（后续的对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后进行1-2分钟的消化，再添加5ml完全培养基终止反应。再次离心并弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬，并按照1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

1) 可重发的情况及判定标准

1. 运输途中发生的细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等问题，均可重发。
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰发货细胞的复苏后24小时内大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），均可重发。
4. 干冰发货的细胞复苏后若24小时内出现污染，常温发货的细胞静置4小时且未开封亦可重发。
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，并进行台盼蓝染色法鉴定活力，经核实后可重发。
6. 收到细胞后三天内需拍照，三天未告知则视为产品合格。4-7天内出现问题，需提供前3天照片及详细操作步骤，若与技术人员沟通后被判定为我方责任则可重发。
7. 技术人员判断为双方共同责任的，则由双方协商处理或按合同价格的50%收取重发费用。

2) 不予重发的情况

1. 因客户造成的细胞污染，不可重发。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不良，不可重发。
3. 使用非本库推荐的培养体系造成细胞状态不良，不可重发。
4. 细胞状态不良且未提供细胞培养前3天照片，不可重发。
5. 细胞培养时经过其它处理的不予重发。
6. 收到细胞后两天内未告知的，不可重发。
7. 其他情况视具体情况而定。

通过选择918博天堂的细胞培养产品，您可以享受优质的服务和支持，确保实验的顺利进行。