918博天堂提供的人前列腺癌细胞VCAP的培养说明书，旨在帮助科研人员高效、安全地培养和处理细胞。以下是详细的培养步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

请根据标准细胞培养规范，确保培养环境的适宜性，使用37℃、5% CO2的培养箱进行培养。

二、细胞处理与培养

在收到细胞后，首先使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内开展严格的无菌操作。细胞瓶应放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以保证细胞稳定。显微镜观察细胞的生长情况，并记录不同倍数（如40x, 100x, 200x）的照片。前三天的记录是重要的售后依据，未提供照片默认状态良好。

在传代过程中，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。在更换培养基时，请确保瓶盖拧松，以避免气压变化对细胞造成损害。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，请将培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基并放入培养箱继续培养。当细胞密度超过80%时，可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞是否已脱落， promptly加入5ml培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管，在1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入培养箱继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液后轻轻吹打细胞再转移至离心管中离心。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱保存，并在转入液氮罐前至少存放24小时。

c、细胞复苏

1. 取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，并用75%酒精消毒外壁。
2. 将细胞转移至含有5ml完全培养基的离心管中，并在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清后重悬细胞，接种至T25培养瓶中，并放入培养箱继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

运输过程中细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养液收集至离心管，离心后重新处理细胞。在操作过程中，请务必保持无菌环境。

五、售后条款

1) 可重发的情况及判定标准

1. 运输途中出现的问题，如细胞丢失、瓶破损等，均可重发。
2. 收到细胞48小时内如出现污染，请及时反馈真实实验结果，经核实后可重发。
3. 对于常温运输后细胞存活率低的情况，需提供照片作为依据，以便重发。
4. 如细胞在识别出问题后24小时内未告知，将视为产品合格。

2) 不予以重发的情况

1. 因客户操作不当造成的细胞污染不予重发。
2. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不良的情况不重发。
3. 需提供在收到细胞后2天内的反馈，否则不重发。

我们期待与您合作，为您的科研提供最优质的细胞服务，选择918博天堂，助力您的科学研究不断向前推进！